HA人星形膠質(zhì)細(xì)胞

 【產(chǎn)品規(guī)格】25cm2 培養(yǎng)瓶
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復(fù)蘇基本技術(shù):
（a）從液氮容器中取出細(xì)胞凍存管后，立即將細(xì)胞凍存管直接浸入37%水浴中，在1－2分鐘內(nèi)搖動(dòng)細(xì)胞凍存管至凍存的細(xì)胞融化。
（b）用75%酒精消毒細(xì)胞凍存管后，小心打開蓋子，用吸管吸出細(xì)胞懸浮液至15ml離心管中，緩慢加入5ml培養(yǎng)基后800rpm離心5分鐘，棄上清，加3－5ml培養(yǎng)基重懸至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，然后放入5%CO2、95%空氣、37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
注：建議使用新鮮配制的培養(yǎng)體系
（c）另外，細(xì)胞計(jì)數(shù)，確定細(xì)胞數(shù)量。
（d）24小時(shí)更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)在5%CO2,  95%空氣、37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
注：建議使用新鮮配制的培養(yǎng)體系
細(xì)胞注意事項(xiàng)：
①在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作
②培養(yǎng)基于 4℃條件下可保存 3-6 個(gè)月
③傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)
④該細(xì)胞只可用于科研
YB-ATCC-2736    MG-63(骨肉瘤細(xì)胞)    進(jìn)口美國ATCC細(xì)胞株，1ml/株
YB-ATCC-2737    HEC-1-B(子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞)    進(jìn)口美國ATCC細(xì)胞株，1ml/株
YB-ATCC-2738    SW1353(骨肉瘤細(xì)胞)    進(jìn)口美國ATCC細(xì)胞株，1ml/株
YB-ATCC-2739    ES-2(卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞)    進(jìn)口美國ATCC細(xì)胞株，1ml/株
YB-ATCC-2740    Saos-2(成骨肉瘤細(xì)胞)    進(jìn)口美國ATCC細(xì)胞株，1ml/株
YB-ATCC-2741    MDA-MB-468(乳腺癌細(xì)胞)    進(jìn)口美國ATCC細(xì)胞株，1ml/株
YB-ATCC-2742    SK-MES-1(肺鱗癌細(xì)胞)    進(jìn)口美國ATCC細(xì)胞株，1ml/株
YB-ATCC-2743    MDA-MB-435S(乳腺癌細(xì)胞)    進(jìn)口美國ATCC細(xì)胞株，1ml/株
YB-ATCC-2744    NCI-H661(大細(xì)胞肺癌細(xì)胞)    進(jìn)口美國ATCC細(xì)胞株，1ml/株
YB-ATCC-2745    ZR-75-1(乳腺癌細(xì)胞)    進(jìn)口美國ATCC細(xì)胞株，1ml/株

 HA人星形膠質(zhì)細(xì)胞

 操作步驟：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

 2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。     
     3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
     4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
    1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項(xiàng)：

1.動(dòng)作要快，胰酶消化，換液什么，細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時(shí)間，所謂的細(xì)胞狀態(tài)差，很多時(shí)候是傳代的原因。
3.有時(shí)間的話，需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細(xì)胞的生長曲線，不會(huì)臨時(shí)要處理，手足無措。
3.要做什么心里要非常清楚，合理安排時(shí)間，細(xì)胞房的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行，可以節(jié)省很多時(shí)間，也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn)。
4.個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套，不要和別人混用，zui近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟。
5.細(xì)胞房不能進(jìn)去太多人，避免相互干擾。