HCC-78人肺腺癌細(xì)胞

【中文縮寫(xiě)】    HCC-78細(xì)胞

 【背景資料】    見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

 【產(chǎn)品來(lái)源】    細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)內(nèi)外著名大學(xué)建系

     提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細(xì)胞特性，一般細(xì)胞培養(yǎng)PBS量是10%，如果出現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)不良情況，可以提高PBS量到15%，待細(xì)胞穩(wěn)定后，調(diào)回PBS量10%，對(duì)于初次實(shí)驗(yàn)者，一般細(xì)胞培養(yǎng)，都需要加入雙抗防止細(xì)胞污染，細(xì)胞匯合度達(dá)到90%，我們開(kāi)始寄送，細(xì)胞這樣可以保持細(xì)胞收到時(shí)，良好的細(xì)胞活力。復(fù)蘇細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1收到細(xì)胞后當(dāng)天換液，全部更換成客戶(hù)自己的新鮮培養(yǎng)基，放進(jìn)培養(yǎng)箱，第二天再消化。

2邊觀(guān)察邊消化，根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)，終止消化時(shí)間，采取以半分鐘間隔吹打細(xì)胞邊緣，如可吹打下來(lái)，即終止消化。客戶(hù)摸索比較好的消化時(shí)間。

3隨細(xì)胞有一份細(xì)胞操作說(shuō)明書(shū)，請(qǐng)客戶(hù)仔細(xì)查看。

4記得加1%雙抗，降低被污染的概率。另外盡早凍存留種，以備后用。

5售后時(shí)間為一周，僅限于細(xì)胞本身的質(zhì)量問(wèn)題，而因乙方自己不當(dāng)操作（不規(guī)范操作，消化過(guò)度，不加雙抗導(dǎo)致的污染等）導(dǎo)致的細(xì)胞問(wèn)題不在售后范疇。

6收到細(xì)胞后，如細(xì)胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問(wèn)題，煩請(qǐng)當(dāng)天盡快聯(lián)系，以便處理。當(dāng)天及時(shí)反饋細(xì)胞情況和細(xì)胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù)，請(qǐng)您務(wù)必重視。

7剛收到細(xì)胞時(shí)，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天，利于細(xì)胞盡快恢復(fù)狀態(tài)，細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，再調(diào)回10%即可。

（其中1,2條針對(duì)于貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞詳情請(qǐng)見(jiàn)細(xì)胞操作說(shuō)明書(shū)）"   

    復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

        【產(chǎn)品規(guī)格】    1*10（6）

        【安全級(jí)別】    1

        【產(chǎn)品種屬】    人

        【組織來(lái)源】    肺

        【細(xì)胞形態(tài)】    上皮細(xì)胞樣

        【細(xì)胞特性】    貼壁

"細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇和使用：

MEM：成分簡(jiǎn)單，細(xì)胞貼壁細(xì)胞

DMEM：分高糖型和低糖型。

IDMEM：適合細(xì)胞密度低，生長(zhǎng)困難的細(xì)胞。如雜交細(xì)胞的篩選，DNA轉(zhuǎn)染后轉(zhuǎn)化細(xì)胞的篩選培養(yǎng)。

RPM1640：應(yīng)用*泛的培養(yǎng)基之一。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，主要針對(duì)淋巴細(xì)胞，也適合其他細(xì)胞。

199、109培養(yǎng)基：成分齊全，培養(yǎng)效果較好。

F10培養(yǎng)基：適合小鼠及人類(lèi)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。

F12培養(yǎng)基：適合單細(xì)胞分離培養(yǎng)及無(wú)血清培養(yǎng)。

McCoy’s5A培養(yǎng)基：特別適合原代細(xì)胞及較難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)。"    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

           細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

        【培養(yǎng)條件】    詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

        【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

        【凍存條件】    詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

        【主要文獻(xiàn)】    請(qǐng)具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

細(xì)胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法：

傳代培養(yǎng)：是指細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶以1：2或1：2以上的比例轉(zhuǎn)移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細(xì)胞，可根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法進(jìn)行細(xì)胞傳代。貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用消化法傳代，部分貼壁的細(xì)胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細(xì)胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進(jìn)行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進(jìn)行傳代。

HCC-78人肺腺癌細(xì)胞

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備基礎(chǔ)培養(yǎng)基( GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉 0.11g/L)；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1.收到細(xì)胞后首先觀(guān)察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2.先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(shí)（4h左右），穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，切忌在溫箱內(nèi)靜置過(guò)夜。

3.靜置后鏡檢，拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

4.  懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)液體都轉(zhuǎn)移至無(wú)菌離心管內(nèi)，1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，培養(yǎng)基上清可備用，管底細(xì)胞沉淀用培養(yǎng)基重懸。鏡檢時(shí)若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)；若密度未超過(guò)80%，細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，待達(dá)到80%時(shí)再正常傳代。備注：聚團(tuán)生長(zhǎng)慢，有密度依賴(lài)，必須使用T25培養(yǎng)瓶豎立培養(yǎng)，3天一次半量換液一次，1-2周傳代一次。

貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，收集細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。備注：細(xì)胞貼壁慢，傳代后細(xì)胞放2天不動(dòng)。

5.細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補(bǔ)加2%血清。剛開(kāi)始傳代時(shí)建議一半用細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，一半用客戶(hù)自備的培養(yǎng)基，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件，以免因不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)狀態(tài)不佳。