CHP-212人腦神經母細胞瘤細胞

細胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
培養(yǎng)條件:RPMI-1640(Hyclone)，90%;優(yōu)質胎牛血清，10%。 氣相:空氣，95%;二氧化碳，5%; 溫度:37℃。
傳代方法:建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件:*培養(yǎng)基50%+40%FBS+10%DMSO
二、使用方法
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1.收到細胞，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快和我們聯(lián)系。
2.如包裝完好，取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)是否正常，細胞的貼壁情況以及細胞密度,然后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3.細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，棄除培養(yǎng)瓶中大部分液體，只剩5-10ml左右培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)就可以了，超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。
如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉/分鐘離心3-5Min,吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
4.細胞傳代
1)吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS 2-3ml清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1.5ml至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴1-2min左右;倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3)用吸管輕輕吹打混勻，按1:2適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5ml，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
三、注意事項
1.在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作;
2.傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài);
3.該細胞只可用于科研。
剛收到細胞時，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天，利于細胞盡快恢復狀態(tài)，細胞穩(wěn)定后
再調回10%即可
  收到細胞后如細胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問題，煩請當天盡快聯(lián)系，以便處理。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要參考依據(jù)，請您務必重視。

CHP-212人腦神經母細胞瘤細胞

稀釋方法：

     方法1. 實驗前，將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋（或PBS稀釋），將稀釋后的抗體分裝5-10支（20ulx5支或10ulx10支），放入-20℃保存，用一支拿一支，避免反復凍溶。

     方法2. 實驗前,也可將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋50ul（或PBS稀釋50ul）成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存，用多少吸多少。方法3. 預試驗可做幾個梯度1：100、200、400背景高還可做上去，選一個 的稀釋比例，再正式做，效果。工作液的稀釋-使用抗體稀釋液。 公司產品經無數(shù)次市場驗證，若出現(xiàn)質量問題可無條件換貨或退貨。

常用免疫組織化學方法的原理：

      1. 免疫熒光細胞化學技術：將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量。

       2. 免疫酶細胞化學技術：是目前免疫組織化學研究中zui常用的技術．基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞或組織內的相應抗原進行定位或定性研究。
       3. 免疫膠體金技術：就是用膠體金標記一抗，二抗或其他的能特異性的結合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對組織或細胞內的抗原進行定性，定位或定量研究．由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究。
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