Hs895.T人黑色素瘤細胞

關于培養(yǎng)瓶內加入培養(yǎng)基的量的問題。
這個是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml，大方瓶14ml的。有些細胞反而是培養(yǎng)基少一點相反細胞形態(tài)會長得比較好。（可能也是競爭很大，有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。）對于生長速度快的細胞，易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基細胞形態(tài)會更好。但是要注意換液掌握。
關于選擇培養(yǎng)瓶的問題。
個人發(fā)現(xiàn)生長速度快的細胞在玻璃瓶內生長的狀態(tài)會比一次性塑料瓶相對好一些。而對于同一種細胞，在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內的生長狀態(tài)也比塑料瓶內好。這可能是因為塑料瓶比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的細胞在塑料瓶這種相對“更安逸”的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。
所以對于生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài)，塑料瓶比玻璃瓶會好，對于生長速度慢的細胞，玻璃瓶則會更好。同樣，對于同一種細胞，在其生長速度慢的時候，塑料瓶會好一點，比如剛剛復蘇的時候，或者原代培養(yǎng)的時候。而在其生長旺盛的時候，玻璃瓶則相對會好一點。

Hs895.T人黑色素瘤細胞

消化/傳代。

1、移去MEF培養(yǎng)基

2、用5ml不含鈣鎂離子的PBS洗滌細胞(以去除胰蛋白酶的抑制物)。

3、每個培養(yǎng)瓶里加入1.5ml的胰蛋白酶/EDTA(0.05%的胰蛋白酶)，消化5min。

4、為了使細胞分散開，輕輕吹打細胞。

5、每加入1ml的胰蛋白酶/EDTA，加入至少1ml的MEF培養(yǎng)基以終止胰蛋白酶的消化。

6、將細胞懸液加入到15ml的錐形管中，吹打幾次，使細胞分散為單個的。

7、在新的T75培養(yǎng)瓶中加入10mlMEF培養(yǎng)基。

8、將細胞懸液分裝到新的T75培養(yǎng)瓶中，放在37℃培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

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